常见鸽病的误诊原因及用药的常见原则性错误(一)
禽病诊断史发展历程和科学态度是造成鸽病及禽病误诊的最常见原因,而用药错误不仅仅影响到鸽子更会影响到人类健康。
看图和剖检诊断的历史必然性和误诊必然性
看图和剖检诊断在今天仍然被很多专业兽医师和大多养殖企业使用着,但看图和剖检诊断是最不准的诊断方法。例如部分沙门氏菌会有产酸、产气现象,所以患病鸽的粪便为绿色带气泡水便并伴有酸味儿;但绿色发酸带气泡水便未必就是沙门氏菌病,原因很简单,产酸产气的细菌不止沙门氏菌。所以,根据粪便就判断为沙门氏菌感染显然不够严谨。可惜的是很多养殖企业的技术高手们依然信誓旦旦不容置疑的鼓吹他们的经验和火眼金睛,这些人的学历最低大专,本科也不在少数,想想真是教育的悲哀。高等教育我认为最核心的是让学生明白“科学态度”,没有科学态度作为前提学再多的知识最终还会误事。
青霉素问世标志着人类正式迈入抗生素时代。抗生素时代之初,血清学和分子生物学刚刚处于萌芽阶段,所以看图和剖检诊断是那个时代的必然产物。再加上社会流动性小,养殖量小等客观原因导致那个时代致病微生物远远少于当代,这就决定了那个时代看图和剖检诊断准度比较高。伴随养殖量激增,社会流动性增强,致病微生物因为基因转移和变异等等原因种类大增。2010年的沙门氏菌国家检测标准附录中的种类已近百种之多,这些都是致病性沙门氏菌,再加上非致病性沙门氏菌那我就不知道到底有多少种了,而且,毫无疑问,种类还会继续增加。
遥记当年见过一加拿大黑人兽医师,此君两个大拇指的指甲“尖、厚、硬、长而锋利”。他给鸡剖检从来不用剪子,用指甲直接划开,根据症状即可判断出是哪种病,之后下药麻利,疗效确实。伴随时代发展,据说他因为误诊病例逐渐增多而逐渐淡出家禽养殖行业。
以沙门氏菌检测的GB4789.4—2010标准操作流程为例简单介绍一下如何诊断
这个标准是食品领域的沙门氏菌检测标准,参考了一些禽病沙门氏菌检测标准,个人觉得还是这个标准更全面和系统一些,因此以这个标准为例来简单阐述一下如何以目前的科技水平准确诊断沙门氏菌。
整个检测流程可分为“前曾菌、曾菌、分离、生化试验、血清学鉴定、出报告”这六个渐次过程。我们以粪便为检测物,简单阐述一下操作过程。
前曾菌:把粪便收集好,称取25mg粪便样品倒入盛有225ml的缓冲蛋白胨水(BPW)的无菌均质杯中,之后以8000转/分钟-10000转/分钟的转速离心2分钟。无菌操作将清液样品转至 500 mL 锥形瓶中于 36 ℃±1 ℃培养 8 h~18h。
曾菌:轻轻摇动培养过的样品混合物,移取 1 mL,转种于 10 mL 四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液内,于 42 ℃±1 ℃培养 18 h~24h。同时,另取 1 mL,转种于 10 mL亚硒酸盐胱氨酸 (SC) 内,于 36 ℃±1 ℃培养 18 h~24 h。这两种培养基的不同温度原因在于沙门氏菌不仅仅只寄生于禽类,因为禽类和哺乳动物体温不同,所以分别进行了两种温度的曾菌培养。
关于曾菌的说明:粪便中实际上有很多种细菌和微生物,很多人觉得直接上显微镜就能看到致病菌,这是原则性错误。沙门氏菌的个头得用1600倍的油镜看,这是光学显微镜的最高倍数了,这个倍数决定细菌必须制成标本才能观察。油镜的使用特点决定不能直接观察活体,因为油镜无法使用盖玻片,而粪便中的微生物浓度太低不支持成功制作标本,所以无论是为了革兰氏染色还是为了进一步实验都得有曾菌这个过程。
分离:分别用接种环取增菌液 1 环,划线接种于一个亚硫酸铋( BS) 琼脂平板和一个木糖赖氨酸脱氧胆盐( XLD) 琼脂平板(或 HE 琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板)。于 36 ℃±1 ℃分别培养 18 h~24 h (XLD 琼脂平板、HE 琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板) 或 40 h~48 h (BS 琼脂平板),观察各个平板上生长的菌落,根据各种培养基菌落颜色和状态“粗”判断疑似沙门氏菌落。
关于分离的说明:我们的细菌样品来自粪便,而粪便中有很多种细菌,不同菌属对培养基的要求以及代谢产物都不同,根据菌落颜色和状态来初步判断哪个或哪些菌落是疑似沙门氏菌,这个类似于PH试纸的显色原理。
生化试验:细菌种属不同生化特征也不同,就像三价铁离子可以用硫氰化钾鉴定一样的道理,我们根据各种细菌代谢产物不同来进行化学鉴定。这种鉴定通常只能判断出是哪个“属”的细菌,而不能具体到是这个属中的哪种细菌。如果想进一步鉴定还得进行血清学鉴定,但到此为止已经可判断出是不是沙门氏菌了。
血清学试验:血清学鉴定的依据是抗原抗体反应,也是最终确定究竟是哪种沙门氏菌的方法。这一步试验是成本最高的试验,为什么高?因为沙门氏菌种类太多了。做完这步就可以出报告了。
细菌形态及沙门氏菌分类
细菌按形状可分为杆菌和球菌,按有无鞭毛可分为有鞭毛(H)和无鞭毛(O),即使有鞭毛,那鞭毛的数量也有本质区别。沙门氏菌按形态分为无毛(O)和有毛(H)两种,但实际上沙门氏菌是一个很大的属,下面把GB4789.4—2010标准的沙门氏菌种类列举部分。
A 群
甲型副伤寒沙门氏菌
B 群
基桑加尼沙门氏菌、阿雷查瓦莱塔沙门氏菌、马流产沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、利密特沙门氏菌、阿邦尼沙门氏菌、维也钠沙门氏菌、伯里沙门氏菌、斯坦利沙门氏菌、圣保罗沙门氏菌、里定沙门氏菌、彻斯特沙门氏菌 、德尔卑沙门氏菌、阿贡纳沙门氏菌、埃森沙门氏菌、加利福尼亚沙门氏菌、金斯敦沙门氏菌、布达佩斯沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、拉古什沙门氏菌、布雷登尼沙门氏菌、基尔瓦沙门氏菌Ⅱ、海德尔堡沙门氏菌、印地安纳沙门氏菌、斯坦利维尔沙门氏菌、伊图里沙门氏菌。
C1 群
奥斯陆沙门氏菌、爱丁保沙门氏菌、布隆方丹沙门氏菌Ⅱ、丙型副伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、猪伤寒沙门氏菌、罗米他沙门氏菌、布伦登卢普沙门氏菌、里森沙门氏菌、蒙得维的亚沙门氏菌、里吉尔沙门氏菌、奥雷宁堡沙门氏菌、奥里塔蔓林沙门氏菌、汤卜逊沙门氏菌、康科德沙门氏菌、伊鲁木沙门氏菌、姆卡巴沙门氏菌、波恩沙门氏菌、波茨坦沙门氏菌、格但斯克沙门氏菌、婴儿沙门氏菌、巴布亚沙门氏菌、巴累利沙门氏菌、哈特福德沙门氏菌、三河岛沙门氏菌、姆班达卡沙门氏菌、田纳西沙门氏菌、布伦登卢普沙门氏菌、耶路撒冷沙门氏菌。
C2 群
习志野沙门氏菌、名古屋沙门氏菌、加瓦尼沙门氏菌、慕尼黑沙门氏菌、蔓哈顿沙门氏菌、纽波特沙门氏菌、科特布斯沙门氏菌、茨昂威沙门氏菌、林登堡沙门氏菌、塔科拉迪沙门氏菌、波那雷恩沙门氏菌、利齐菲尔德沙门氏菌、病牛沙门氏菌、查理沙门氏菌。
C3 群
巴尔多沙门氏菌、依麦克沙门氏菌、肯塔基沙门氏菌。
D 群
仙台沙门氏菌、伤寒沙门氏菌 、
塔西沙门氏菌 、以色列沙门氏菌 、肠炎沙门氏菌 、布利丹沙门氏菌 、沙门氏菌 Ⅱ 、都柏林沙门氏菌 、芙蓉沙门氏菌 、巴拿马沙门氏菌 、戈丁根沙门氏菌 、爪哇安纳沙门氏菌 、鸡-雏沙门氏菌。
E1 群
奥凯福科沙门氏菌、瓦伊勒沙门氏菌、明斯特沙门氏菌、鸭沙门氏菌、纽兰沙门氏菌、火鸡沙门氏菌、雷根特沙门氏菌、西翰普顿沙门氏菌、阿姆德尔尼斯沙门氏菌、新罗歇尔沙门氏菌、恩昌加沙门氏菌、新斯托夫沙门氏菌、伦敦沙门氏菌、吉韦沙门氏菌、鲁齐齐沙门氏菌、乌干达沙门氏菌、乌盖利沙门氏菌、韦太夫雷登沙门氏菌、克勒肯威尔沙门氏菌、列克星敦沙门氏菌。
E4 群
萨奥沙门氏菌、卡拉巴尔沙门氏菌、山夫登堡沙门氏菌、斯特拉特福沙门氏菌、塔克松尼沙门氏菌、索恩保沙门氏菌。
F 群
昌丹斯沙门氏菌、阿柏丁沙门氏菌、布里赫姆沙门氏菌、威尼斯沙门氏菌、阿巴特图巴沙门氏菌、鲁比斯劳沙门氏菌。
其 他 群
浦那沙门氏菌、里特沙门氏菌、密西西比沙门氏菌、古巴沙门氏菌、苏拉特沙门氏菌、松兹瓦尔沙门氏菌、非丁伏斯沙门氏菌、威斯敦沙门氏菌、上海沙门氏菌、自贡沙门氏菌、巴圭达沙门氏菌、迪尤波尔沙门氏菌、卢肯瓦尔德沙门氏菌、拉马特根沙门氏菌、阿德莱沙门氏菌、旺兹沃思沙门氏菌、雷俄格伦德沙门氏菌、莱瑟沙门氏菌、达莱姆沙门氏菌。
鸽子沙门氏菌的若干猜想及实验设计
在临床上通常不必进行血清学检测来具体确定究竟是哪种沙门氏菌,只需把试验做到生化这一步就可以了。但,我一直担心鸽子的沙门氏菌不属于上面任何一种沙门氏菌,而是独立的家鸽沙门氏菌,并且家鸽沙门氏菌可能也不仅仅只是一种,完全有可能这种是詹森沙门氏菌,那种是XXX公棚沙门氏菌,亦或沈阳赛鸽沙门氏菌等等。倘真如我猜想,虽于临床治疗并无实质影响,但对于预防的工作量那就大了。我们要详细研究赛鸽沙门氏菌的传播、易感、携带、发病条件等等问题。
詹森曾经说过“短途鸽子应该具备中短途快速还巢,中长途稳定还巢能力”,但很多鸽子第一趟300还可以,第二趟300就丢了。这种现象我一直觉得可能和体内致病菌及病毒的增殖、发病有关。还是以沙门氏菌为例,任何一只鸽子都能检测出来沙门氏菌,只不过沙门氏菌的量多寡而已。赛鸽粪便看起来很好,但这并不代表沙门氏菌含量是安全的,可能在鸽子飞到200公里的时候,沙门氏菌就要发作了,所以表现为失格甚至丢鸽。于是我产生了一个假设“鸽子体内的致病菌是否会随着飞行距离变化而呈现快速增殖和致病现象”,这个假设已经得到类似实验的验证。接下来我的实验设计为“把荧光质粒植入我家鸽子肠道内的沙门氏菌体内,进而对沙门氏菌在不同飞行距离的增殖和致病进行便捷的量化跟踪,目的是得到赛鸽上笼前的沙门氏菌安全指标,超标就不上笼,”。
很多人家里都来过天落鸟,天落鸟大多进棚就能发现有病。看上去没病的天落鸟,只要放到朝北的阳台,也就是说没有阳光直射的地方正常饲养不超过三天大多也会发病。这种方法是诱导发病的一种方法,大家如果有兴趣可以把刚从公棚买回来的迟归鸽或者成绩靠后的鸽子用此方法试一下,大多也发病。剖检为腺胃乳头有出血点,脾肿大,肾肿大,肝脏肿大边缘充血,肺部充血,气囊有炎症、哈德氏腺肿胀,大脑皮层充血和有出血点等等。这也说明这些迟归鸽或者成绩靠后鸽子亦或天落鸟当初根本就不具备上笼的健康条件,赛鸽界确实需要一套行之有效的量化的赛鸽上笼健康指标。
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